...ei se face pe fluorura de sodiu 0.01g pentru 1ml sange recoltat pentru preintampinarea coagularii si a fenomenului de glicoliza.Dozarea glucozei prin metoda colorimetrica cu o-toluidinaPrincipiu Prin conjugarea aldo- si cetohexozelor cu amine aromatice se obtin compusi colorati a caror intensitate se poate determina prin colorimetrare sau fotometrare.Pentru dozarea glucozei, amina cea mai potrivita este o-toluidina care da cu aldohexozele un compus intens colorat in verde.Reactivi-solutie de acid tricloracetic 20-solutie de acid tricloracetic 5-solutie de o-toluidina 0.75MPreparareSe amesteca 80ml o-toluidina cu 920ml acid acetic glacial si se adauga 2,5g tiouree. Se conserva in sticle brune maximum o luna-solutie standard de glucoza 100mgPreparareSe dizolva 100mg glucoza in 80ml solutie saturata de acid benzoic si dupa dizolvare se completeaza cu aceeasi solutie pana la 100ml. Solutia se poate conserva foarte bine cateva luni.Tehnica de lucruSe pregatesc 2 eprubete de centrifuga, una pentru proba de analizat si una pentru proba standardExprimarea cantitatiiProba de analizatProba standardSange total, ser sau plasmaMl0.2-Solutie standard de glucozaMl-0.2Apa distilataMl1.51.5Acid tricloracetic 20Ml0.50.5 Fiecare eprubeta se agita penrtu omogenizare, se lasa in repaus 5 minute, dupa care se centrifugheaza timp de 10 minute la 3500-4000 turatii pe minut. Din supernatantul rezultat in fiecare eprubeta,se pregatescExprimareacantitatiiProbaDe analizatProbastandardProbaIn albSupernatant de la proba cu sangeMl0.5--Supernatant de la proba standardMl-0.5-Solutie de acid tricloracetic 5Ml--0.5Solutie o-toluidinaMl0.52.52.5Se agita eprubetele si se tin timp de 8 minute in baia de apa la fierbare, dupa care se racesc la robinet. Dupa racire se masoara extinctiile probelor de analizat si proba standard in raport cu proba alb. Citirile se fac la 635nm .Calcularea rezultatelorMl glucoza100ml sange ser sau plasmaPAPS x 100In care PAextinctia citita la proba de analizatPSextinctia citita la proba standardObservatii-ceto-sau aldopentozele dau coloratie cu o-toluidina dar de intensitate foarte slaba, neglijabila pentru concentratia acestor substante in sange. Galactoza poate interfera in cazurile de galactozemie.-daca determinarea glucozei se face in mai putin de 3 ore de la recoltarea probei, atunci nu este obligatorie recoltarea pe substante anticoagulante.Dozarea glucozei prin metode colorimetrica cu antronaPrincipiuGlucoza este deshidratata cu acid sulfuric obtinandu-se hidroximetilfurfurol, care cu antrona formeaza un compus de condensare colorat in galben-rosiatic. Extinctia se citeste la 620nm.Reactivi-solutie de acid tricloracetic 5-reactiv cu antronaPreparareLa 280ml apa distilata se adauga 720ml acid sulfuric concentrat. Se adauga 500 mg antrona si 10g tiouree. Se incalzeste la 80 grade C pe baia de apa pana la dizolvarea completa. Reactivul se pastreaza la 4 grade C timp de cateva saptamani.-solutie standard de glucoza 200mg.Tehnica de lucruSe pipeteaza in 3 eprubete de centrifuga pentru proba de analizat, proba standard si proba in albExprimareacantitatiiProbaDe analizatProbastandardProbaIn albSolutie de acid tricloracetic 5 Ml0.90.90.9Sange total, plasma sau serMl0.1--Solutie standard de glucozaMl-0.1-Apa distilataMl--0.1Continutul fiecarei probe se amesteca prin agitare,dupa care se centrifugheaza numai eprubeta cu proba de analizat.Din supernatantul probelor se fac urmatoarele amestecuriExprimarea cantitatiiProbaDe analizatProbastandardProbaIn albSupernatant cu proba de analizatMl0.5--Din amestecul cu proba standardMl-0.5-Din amestecul cu proba in albMl--0.5Reactiv cu antronaMl5.05.05.0Se incalzesz eprubetele timp de 15 minute pe baia de apa la fierbere. Dupa racire se fotometreaza la 620nm.Calcularea rezultatelorMg glucoza100ml sangeser sau plasmaPAPS x 100In care PAextinctia citita la proba de analizatPSextinctia citita la proba standardDozarea glucozei din sange prin metoda tritrimetricatehnica Haghedorn si JensenPrincipiuGlucoza din sange,prezinta in filtratul de sange deproteinizat in prealabil prin incalzire cu un amestec de sulfat de Zn si hidroxid de Na,reduce fericianura de K la ferocianura de K. fericianura de K in exces , elibereaza I dintr-o solutie de iodura de K,in mediu acid. I eliberat este titrat cu o solutie de tiosulfat de Na in prezenta solutiei de amidon ca indicator.Pentru ca reactia sa fie completa, ferocianura de K si de Na se precipita cu sulfatul de ZnExcesul de ferocianura de K va reactiona cu iodura de K in mediu acidIodul se titreaza cu solutie de tiosulfat de NaReactivi-solutie de sulfat de Zn 0.45. se pastreaza aproximativ 3 saptamani-solutie de NaOH 0.1 N-solutie de fericianura de K 0.01 NPreparare0.329g fericianura de K se dizolva in 80ml apa distilata si se completeaza apoi la 100ml. Solutia se pastreaza in sticle brune si la intuneric solutia A.-solutia de sulfat de Zn 7.5 in solutie de clorura de Na 25 solutia B.-solutie de iodura de K 7.5 in solutie de clorura de Na 25 9solutia C-solutie de clorura de Na 25-solutie de acid acetic 3Preparare3ml acid acetic glacial p.a.,apa distilata pana la 100ml solutia D-solutie de tiosulfat de Na 0.005Nasolutie de tiosulfat Na 0.1N 26g Na2S2O3 . 5H2O,apa distilata pana la 1000ml, 2 picaturi NaOH 40. Se lasa 2-3 zile sa stea in repaus la intuneric dupa care se stabileste titrul solutiei.b 5ml solutie de tiosulfat de Na 0.1 N se dilueaza cu apa distilata la 1000 ml. -solutie de carbonat de Na 2.12g-solutie de amidon 1 in solutie saturata de NaCl.Tehnica de lucruIn doua eprubete se pipeteaza cate 5 ml solutie de sulfat de Zn 0.45 si 1 ml solutie de NaOH 0.1 N.Intr-o eprubeta care contine proba de analizat, se adauga 0.1 ml sange. Cele doua eprubete se tin intr-o baie de apa la fierbere timp de 3 minute,dupa care se filtreaza. Eprubetele se spala cu 3 ml apa fierbinte trecuta prin hartia de filtru. In filtrat se adauga 1 ml solutie fericianura de K 0.01 N si 1 ml solutie de carbonat de Na 2.12g, se amesteca prin agitare si se incalzeste la fierbere pe baia de apa, timp de 15 minute. Se raceste imediat. Daca fericianura s-a decolorat, se mai adauga un ml solutie fericianura de K 0.01 N si se mai incalzeste 15 minute. Se raceste si se adauga apoi 2 ml sulfat de Zn 7.5,1 ml iodura de K 7.5 si 2 ml acid acetic 3. Imediat se titreaza iodul eliberat cu o solutie de tiosulfat de Na 0.005 N, folosind o microbiureta de 2 ml. Titrarea se face in prezenta de 5 picaturi din solutia de amidon 1 ca indicator pana la disparitia culorii albastre.Calcularea rezultatelorAfland prin titrare volumul de tiosulfat de Na folosit , se citeste din tabel mg de glucoza la 100 ml.Daca se folosesc 2 ml solutie de fericianura de K 0.01 N la titrare,atunci se adauga 385mg la 100 ml.totdeauna se va folosi si o proba martor care ne ofera o masura a impuritatilor reducatoare din reactivi. Daca nu exista impuritati reducatoare, titrarea blancului se ve face cu 2 ml tiosulfat de Na 0.005 N. valoarea martorului exprimata in mg glucoza100 m...
Download